利用的是競爭法的原理。生物素和非生物素標記的抗原競爭性結合包被板上有限的抗體結合位點。生物素抗原結合到抗體上的量與樣品中抗原的量成反比。系統達到平衡后，洗板除去游離的生物素抗原，結合到抗體上的生物素抗原可以用抗生物素堿性磷酸酶標記物和對硝基苯磷酸底物檢測出來。用已知的標準品數據做一條標準曲線，將未知樣品的酶活性與標準曲線進行比較就可以定量出未知樣品的量。

組成成分：

數量	標記	成分
1×12×8	MTP	微孔板，微孔中包被了抗兔IgG（羊，多克隆）。
3×2ml	BIOTIN LYO	褪黑激素生物素，凍干，內含穩定劑。
3×2ml	ANTISERUM LYO	褪黑激素抗血清，凍干粉，內含抗血清（兔，多克隆）和穩定劑。
1×250ul	ENZCONJ CONC	酶聯物，80倍濃縮，內含堿性磷酸酶標記的抗生物素抗體（羊）、Tris緩沖液和穩定劑。
1×6×2ml	CAL A-F LYO	標準品A-F，凍干粉，內含穩定劑，提取濃度請見試劑瓶標簽或QC質控品。
1×2×2ml	CONTROL 1+2 LYO	質控品1+2，凍干粉，內含穩定劑，濃度/可接受范圍請見試劑瓶標簽。
1×100ml	WASHBUF CONC	洗滌液，10倍濃縮，內含磷酸緩沖液
32×13ml	PNPP SUBS	PNPP 即用
1×15ml	PNPP STOP	PNPP終止液，即用，內含1M的NaOH和0.25M的EDTA。
2×10	EXTRCOL	提取柱，即用，C18 RP，1cm3/100mg。另需提取柱可從IBL定購（編號：KEME761）
3×	FOIL	封板紙

所需材料（未提供）

1）移液器，體積：50; 500ul

2）試管（12×75mm）

3）軌道振蕩器（400-600rpm）

4）旋渦混合器

5）帶儲器的8道移液器

6）洗滌瓶，自動或半自動洗板機

7）離心機（冷凍離心機更適宜）：100-200×g，也可選用多頭抽真空裝置（例如：Mallinekrodt-Baker 或Waters）。

8）甲醇（HPLC級）

9）蒸發離心機

10）可在405nm處讀數的酶標儀（參考波長600-650nm）

11）蒸餾水或去離子水

12）吸水紙、取樣吸頭和計時器

儲存條件：

必須在2-8℃的環境下運輸和儲存，避免太陽直射。樣品的儲存與穩定性及試劑準備將在相關章節中闡述,如果將包被板密封并儲存于2-8℃的環境下時,試劑在有效期內穩定。用甲醇洗提后的提取柱可用于其它樣品的提取或儲存于2-8℃的環境下。提取柱可重復使用4次。

樣本要求：

血清，血漿（EDTA，肝素）

按照靜脈穿刺的常規注意事項采集樣品，血液樣品自采集到實驗時都必須保證其化學完整性。不要使用明顯溶血、黃疸和脂血樣品。混濁的樣品應當在實驗開始前離心以除去所有的顆粒性物質。
儲存	2-8℃	≤-20℃	≤-70℃	避免太陽直射，避免反復凍融。
穩定性	24小時	3個月	1年	避免太陽直射，避免反復凍融。

檢測方法：

注意	用于96人份檢測色試劑盒成分可分成3次進行。下列所述體積為檢測32人份時所需要的量。

凍干或濃縮成分的準備：

稀釋/溶解	成分		稀釋劑	比例	備注	儲存	穩定性
15ml	洗滌液	150ml	雙蒸水	1：10		2-8℃	8周
	標準品和質控品	2.0ml	雙蒸水		靜置15min，混合時避免氣泡	≤-20℃	直至有效期
	褪黑激素生物素	2.0ml	已稀釋的洗滌液		靜置15min，混合時避免氣泡	臨時配置,只能使用一次
	褪黑激素抗血清	2.0ml	蒸餾水		靜置15min，混合時避免氣泡
70ul	酶聯物	5.6ml	已稀釋的洗滌液	1:81
10ml	未稀釋甲醇	100ml	蒸餾水	10%(v/v)

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