流行性出血熱（漢坦型）試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中人流行性出血熱抗體(EHF-Ab)表達。用純化的人流行性出血熱抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中流行性出血熱抗體相結合，經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP標記的流行性出血熱抗原結合，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中人流行性出血熱抗體(EHF-Ab)的存在與否。

 

　　流行性出血熱（漢坦型）標本要求：

 

　　1、標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

 

　　2、不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

 

　　流行性出血熱（漢坦型）操作步驟：

 

　　1、編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

 

　　2、加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，

 

　　3、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

 

　　4、配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

 

　　5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

 

　　6、加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

 

　　7、溫育：操作同3。

 

　　8、洗滌：操作同5。

 

　　9、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

 

　　10、終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

 

　　11、測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。