TNF-α檢測試劑盒是在免疫酶技術的基礎上發展起來的一種新型的免疫測定技術。檢測過程包括抗原（抗體）吸附在固相載體上稱為包被，加待測抗原（抗體），再加相應酶標記抗體（抗原），生成抗原（抗體）-待測抗體（抗原）-酶標記抗體的復合物，再與該酶的底物反應生成有色產物。借助分光光度計的光吸收計算抗體（抗原）的量。待測抗體（抗原）的定量與有色產生成正比。TNF-α檢測試劑盒用于測定血清，血漿及相關液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等標本。

　　TNF-α檢測試劑盒的操作步驟：

　　1.標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在、第二孔中分別加標準品100μl，然后在、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為18mIU/mL，12mIU/mL，6mIU/mL，3mIU/mL，1.5mIU/mL）。

　　2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，TNF-α檢測試劑盒測試其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

　　3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

　　4.配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。

　　5.洗滌：小心揭掉TNF-α檢測試劑盒的封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

　　6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

　　7.溫育：操作同3。

　　8.洗滌：操作同5。

　　9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

　　10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

　　11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。TNF-α檢測試劑盒測定應在加終止液后15分鐘以內進行。