德國IBL*，貨號：DB52001

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此ELISA試劑盒可用于人血清和尿液中醛固酮的定量檢測。注：僅供體外診斷用。

此ELISA試劑盒采用的是典型的競爭法。標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和病人樣品中的未標(biāo)記抗原和酶標(biāo)抗原競爭結(jié)合包被板上有限的抗體結(jié)合位點。洗板以除去未結(jié)合的物質(zhì)。洗板后，加入酶底物液。zui后加入終止液以終止酶反應(yīng)，并在酶標(biāo)儀上讀取OD值。包被孔中溶液所顯示的顏色與樣品中醛固酮的量成正比。實驗中所用的標(biāo)準(zhǔn)品可作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，我們可以直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取樣品和質(zhì)控品中醛固酮的量。

醛固酮是一種有效的鹽皮質(zhì)激素，這種鹽皮質(zhì)激素的合成和分泌都會受到體內(nèi)腎素-血管緊張素系統(tǒng)的調(diào)控。醛固酮可促進腎遠曲小管對鈉的重吸收，從而可以保鈉排鉀，進而控制循環(huán)血溶量。醛固酮長期分泌過多會引起高血壓。血清醛固酮的檢測加上血漿腎素水平的檢測通常都用來區(qū)分原發(fā)性和續(xù)發(fā)性醛固酮增多癥。

醛固酮的檢測再加上選擇性抑制和刺激實驗，我們可以將原發(fā)性醛固酮增多癥分為兩種基本類型：

1）由腎上腺瘤（一個或兩個）引起的原發(fā)性醛固酮增多癥。

2）由腎上腺增生引起的原發(fā)性醛固酮增多癥。

這種分類對于疾病的治療與處理具有重要作用。腎上腺瘤一般對外科手反應(yīng)良好，而腎上腺增生在醫(yī)學(xué)上更好處理。總得說來，用ELISA方法檢測血清醛固酮是高血壓鑒別診斷的一個重要輔助工具。

血清：進行一次雙份檢測大概需要0.2ml血清。采集4-5ml血液到相應(yīng)的標(biāo)記試管中，并待其凝血，離心獲取血清。4℃下可穩(wěn)定存放24個小時，如果實驗過幾天再做，可將樣品凍存-10℃的環(huán)境或更低溫度下。

尿液：進行一次雙份檢測大概需要0.2ml尿液。將24小時尿液收集到相應(yīng)的樣品容器中。4℃理可穩(wěn)定存放24小時，如果實驗過幾天再做，可將樣品凍存于-10℃或更低溫度的環(huán)境下。將所有的人樣品都當(dāng)作潛在的生物有害物質(zhì)，處理時應(yīng)當(dāng)特別小心。

血清：此檢測系統(tǒng)是一直接檢測系統(tǒng)，不需要進行任何樣品預(yù)處理。

尿液：使用前用尿液稀釋液按1：50的比例稀釋尿液樣品。例如：用1ml尿液稀釋液稀釋20μl尿液樣品。

1）移液器，50；100；150和300μl

2）取樣吸頭

3）蒸餾水或去離子水

4）搖床

5）酶標(biāo)儀

6）尿液稀釋液（如果用尿液樣品做實驗，就得稀釋樣品），用于尿液樣品的稀釋。

1）兔抗醛固酮抗體包被的可拆包被板，即用。內(nèi)含：抗醛固酮抗體包被的96孔包被板，密封于含干燥劑的包半裝袋中，儲存：冷藏于2-8℃的環(huán)境下，穩(wěn)定性：12個月或標(biāo)簽上的有效期。

2）HRP標(biāo)記的醛固酮酶聯(lián)物，50倍濃縮型，內(nèi)含：HRP標(biāo)記的醛固酮酶聯(lián)物、蛋白緩沖液和無汞防腐劑，體積：300μl/支，儲存：冷藏于2-8℃的環(huán)境下，穩(wěn)定性：12個月或標(biāo)簽上的有效期，制備：使用前用檢測緩沖液按1：50的比例進行稀釋（例如：40μl HRP酶聯(lián)物中加入2ml檢測緩沖液。如果整個包被板都使用，可以用12ml檢測緩沖液稀釋240μl HRP酶聯(lián)物，棄去剩余試劑。

3）醛固酮標(biāo)準(zhǔn)品，即用。6支，內(nèi)含：醛固酮、人血清白蛋白和無汞防腐劑，用血清和一定量的醛固酮制備而成。下表為標(biāo)準(zhǔn)品的大概濃度，具體濃度請見試劑瓶標(biāo)簽：

儲存于2-8℃的環(huán)境下，穩(wěn)定性：12個月或標(biāo)簽上有效期，一旦打開，所有的標(biāo)準(zhǔn)品都必須在14天內(nèi)用完或?qū)⑵鋬龃妫苊夥磸?fù)凍融。

4）質(zhì)控品，即用，1支，內(nèi)含：醛固酮、人血清白蛋白和無汞防腐劑，用緩沖液和一定量的醛固酮制備而成，具體濃度及可接受范圍請見試劑瓶標(biāo)簽。體積：0.6ml/支，儲存：冷藏于2-8℃的環(huán)境下，穩(wěn)定性：12個月或標(biāo)簽上的有效期，一旦打開，所有的質(zhì)控品都必須在14天內(nèi)用完，必免反復(fù)凍融。

5）濃縮冼滌液，10倍濃縮型，1支，內(nèi)含：緩沖液、非離子型去垢劑和無汞防腐劑，體積：50ml/支，儲存：冷藏于2-8℃的環(huán)境下，有效期：12個月或標(biāo)簽上的有效期，制備：使用前用蒸餾水或去離子水按1：10的比例進行稀釋，如果整個包被板都使用，可用450ml蒸餾水稀釋50ml濃縮冼滌液。

6）檢測緩沖液，即用，1支，內(nèi)含：蛋白緩沖液和無汞防腐劑，體積：15ml/支，穩(wěn)定性：12個月或標(biāo)簽上的有效期。

7）TMB底物液，即用，1支，內(nèi)含：TMB、*和非DMF或DMSO，體積：16ml/支，儲存：冷藏于2-8℃的環(huán)境下，穩(wěn)定性：12個月或標(biāo)簽上的有效期。

8）終止液，即用，1支，內(nèi)含：1M的硫酸，體積：6ml/支，儲存：冷藏于2-8℃環(huán)境下，穩(wěn)定性：12個月或標(biāo)簽上的有效期。

樣品預(yù)處理：

血清：無

尿液：使用前用尿液稀釋液按1：50的比例進行稀釋。

使用前必須將所有的試劑都平衡到室溫，標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品都必須作雙份檢測，一旦實驗開，所有的步驟都必須完整的進行下去。

1）制備好即用型的HRP酶聯(lián)物和檢測緩沖液。如果用尿液作實驗，應(yīng)將尿液稀釋好。

2）取出所需數(shù)目的板條，將不用的板條重新密封于包裝袋中并冷藏。

3）將標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品（血清或已稀釋好的尿液）分別50μl加入到相應(yīng)的微孔中（雙份檢測）

4）在每一微孔中加入100μl酶聯(lián)物（建議您使用多道移液器）。

5）室溫環(huán)境下，在包被板搖床上（200rpm）溫育1個小時。

6）每孔用300μl洗滌液洗板3次，并在吸水紙上拍干。

7）以相同的時間間隔，在每一微孔中加入150μl TMB底物液。

8）室溫環(huán)境下，在包被板搖床上溫育15-20分鐘。

9）在每一微孔中加入50μl終止液。

10）加終止液后20分鐘內(nèi)450nm處讀取OD值。

*如果OD值超過450nm濾光片的檢測上限，我們可用405n或415nm代替，OD值可能會比較低，但它并不會影響樣品和質(zhì)控品的實驗結(jié)果。

1）計算兩個標(biāo)準(zhǔn)品OD值的平均值。

2）在半對數(shù)坐標(biāo)紙上，以平均OD值為Y軸、標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為X軸作一條校準(zhǔn)曲線。如果使用免疫檢測軟件，我們可以作四參數(shù)曲線。

3）計算每一未知樣品OD值的平均值。

4）直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取樣品的濃度。

5）將獲得的樣品濃度值乘以稀釋因子。然后乘以24小時尿液的體積，從而其閃單位可變?yōu)閜g/24小時。zui后將pg/24小時除以10⁶，相應(yīng)的單位就變成μg/24小時。

6）如果血清樣品濃度高于1000pg/ml,我們可以用標(biāo)準(zhǔn)品A將其進行稀釋（但稀釋比例不高于1：8）。則其結(jié)果應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋因子。如果尿液樣品的濃度高于1000pg/ml，我們可以用尿液稀釋液對其進行稀釋（但稀釋比例不能高于1：2），zui后其結(jié)果也應(yīng)當(dāng)乘以相應(yīng)的稀釋因子。

轉(zhuǎn)換因子：

pg/ml×2.744＝pmol/L        pmol/L=nmol/L×1000

正常血清參考值

對于所有的臨床檢驗來說，每個實驗室都應(yīng)收集數(shù)據(jù)并建立自己的正常值范圍：

正常尿液參考值

對于所有的臨床檢驗來說，每個實驗室都應(yīng)收集數(shù)據(jù)并建立自己的正常值范圍：

 

 

本譯文僅供參考，詳情請以原文為準(zhǔn)。

 

 

 

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