按照給定的順序執行所有測定步驟，并且在步驟之間沒有任何明顯的延遲。應使用干凈的一次性吸頭來分配每個質控和樣品。將培養箱調整至37°C±1°C。  

1.將100μl質控品和稀釋樣品加入到各孔中。保留A1為基底空白。  

2.使用試劑盒中提供的蓋板膜蓋板。  

3.在37±1℃下孵育1小時±5分鐘。  

4.孵育完成后，移去鋁箔蓋板膜，棄去孔中的內容物，用300μl洗滌液洗滌各孔三次。避免溶液溢出反應孔。每個洗滌周期之間的浸泡時間應為>5秒。最后，在下一步之前，在吸水紙上拍干板孔中液體。  

注意：洗滌至關重要！洗滌不足導致精度差和吸光度值錯誤升高。  

5.將100μl酶結合物加入到除空白孔（例如A1）外的所有孔中。蓋板。  

6.室溫（20?25℃）孵育30分鐘。避免暴露在陽光下。  

7.重復步驟4。  

8.每孔加入100μlTMB底物溶液。  

9.在黑暗中室溫（20?25℃）孵育15分鐘。  

10.以與TMB底物溶液相同的順序和相同的速率將100μl終止液加入到所有孔中。