新喋呤 ELISA 簡明操作說明
（德國IBL原裝）RE:59321
新喋呤生物合成與細(xì)胞免疫系統(tǒng)的活性關(guān)系密切，據(jù)報道在病毒感染病人新喋呤升高，認(rèn)為升高源于直接防御病毒感染細(xì)胞的免疫應(yīng)答。已證實抗原刺激人外周血單核細(xì)胞可引起新喋呤釋放入細(xì)胞培養(yǎng)液中，人巨噬細(xì)胞在體外培養(yǎng)時受γ-干擾素刺激產(chǎn)生新喋呤。人體液中新喋呤水平的測定為細(xì)胞介導(dǎo)免疫的相關(guān)疾病監(jiān)測提供了一種有用和創(chuàng)新的工具。許多傳染病，新喋呤水平升高先于臨床表現(xiàn)和血清變化。通常樣本不會進(jìn)行所有可能的傳染病測定，因此為了降低輸血傳染的危險性，對獻(xiàn)血員樣本進(jìn)行新喋呤測定是有意義的。
測定新喋呤的其它診斷應(yīng)用有：
l 重復(fù)損傷的ICU病人
l 用于預(yù)測HIV感染和惡性疾病
l 移植手術(shù)后病人并發(fā)癥的早期預(yù)測
l 自身免疫性疾病、疾病活動的指征
l 病毒感染的診斷
l 急性病毒和細(xì)菌感染的鑒別診斷
l 慢性感染復(fù)發(fā)和免疫刺激治療的監(jiān)測
實驗原理
本試驗應(yīng)用競爭ELISA原理
一． 試劑準(zhǔn)備（以32個樣本測試配制）
1． 洗滌緩沖液：加15ml濃縮液至干凈的容器中加雙蒸水至300ml（1：20稀釋）2—8℃貯存。
2． 酶聯(lián)結(jié)物：25ul濃縮液加入5ml實驗緩沖液（1：201稀釋），2—8℃zui多貯存24小時。
3． TMB底物液：用9ml TMB底物緩沖液稀釋300ul濃縮液。（1：31稀釋）2—8℃可保存48小時。
二． 樣本收集及貯存
1． 樣本、血清，EDTA 抗凝血漿
2． 貯存 2--8℃24小時
-20℃ 長期貯存，避光保存避免反復(fù)凍溶。
三． 實驗步驟
整個實驗過程應(yīng)避免陽光直射，將試劑盒平衡至室溫。
1． 加10 ul標(biāo)準(zhǔn)品、樣本或質(zhì)控于相應(yīng)反應(yīng)孔中。
2． 加50ul新喋呤抗血清于各孔中。
3． 加100ul酶聯(lián)物。
4． 用封板紙封板后，室溫（20-25℃）振蕩（500轉(zhuǎn)/分），90分鐘。
5． 棄去孔中液體，洗板3次。
6． 加200ul TMB底物液于各孔中。
7． 室溫（20-25℃）避光放置10分鐘。
8． 以加TMB 底物液的順序加100ul終止液于各孔中。
9． 混勻后15分鐘內(nèi)450 nm讀吸光度。
注意：洗滌過程對實驗結(jié)果是重要的。
從標(biāo)準(zhǔn)曲線上可以直接查到樣本的結(jié)果。樣本OD值高于zui大的標(biāo)準(zhǔn)品。應(yīng)將樣本用實驗緩沖液稀釋后檢測，結(jié)果應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。
四． 期望值
血清正常值 小于10nmol/L（2.5ng/ml）
本譯文僅供參考，詳情請以原文為準(zhǔn)。
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